Bioquímica - P14 - Obtención de desoxirribonucleoproteínas
Laboratorio N° 14. Obtención de desoxirribonucleoproteínas (DRNP) del bazo y reacciones cualitativas sobre los productos de su hidrólisis.
Las desoxirribonucleoproteínas se obtienen de tejidos ricos con núcleos celulares (bazo, espermatozoides, etc). DRNP se disuelven en soluciones de sales de concentraciones medias, por ejemplo en cloruro de sodio (1 M), con la formación de soluciones viscosas y nuevamente se precipitan por disolución de estas últimas (hasta 0.15 M) en forma de fibras de nucleoproteína.
Instrumental, reactivos. Centrífuga; baño de agua; varillas de madera; probeta de 50 y 100 ml; vaso de precipitados de 500 ml; bazo (u otro órgano); arena lavada y calcinada; ácido clorhídrico (1 N); cloruro de sodio (0.1 M y 2.0 M); hidróxido de sodio (0.4 %); difenilamina; ribosa (1 %)
Material. 1. Bazo
En el mortero muelen 2 - 3 g de bazo con una cantidad igual de arena, agregan al principio 5 ml de solución 2 M de cloruro de sodio, previamente enfriada, y luego paulatinamente, pequeñas porciones de 50 ml de cloruro de sodio 1 M. La molienda se prolonga durante 15 min en el mortero enfriado con hielo. La masa obtenida de trasvasa a un tubo de centrífuga y centrifugan por 15 min. Después de medir el volumen del centrifugado, le añaden a este, un volumen de agua destilada 6 veces mayor con un chorro fino, agitando lentamente con la varilla de madera. La nucleoproteína que se obtiene en forma de hilos se enrolla en el palito de madera.
Reacción con difenilamina.
El ácido desoxirribonucléico se detecta por su reacción con difenilamina, la cual con desoxirribosa da un color azul. El ácido ribonucléico (o ribosa), a diferencia de ADN , da con este reactivo un color verde.
En un tubo de ensayo colocan un poquito del precipitado de ADN y lo disuelven en 1 - 2 ml de solución 0.4 % de hidróxido de sodio. A la solución le agregan un volumen igual de difenilamina y la mezcla la calientan en baño de agua hirviendo cerca de 10 - 15 min. Aparece un color azul. En otro tubo calientan con difenilamina la solución de ribosa a la cuál se agregó 1 - 2 ml de solución de álcali. La mezcla toma un color verde.
Las desoxirribonucleoproteínas se obtienen de tejidos ricos con núcleos celulares (bazo, espermatozoides, etc). DRNP se disuelven en soluciones de sales de concentraciones medias, por ejemplo en cloruro de sodio (1 M), con la formación de soluciones viscosas y nuevamente se precipitan por disolución de estas últimas (hasta 0.15 M) en forma de fibras de nucleoproteína.
Instrumental, reactivos. Centrífuga; baño de agua; varillas de madera; probeta de 50 y 100 ml; vaso de precipitados de 500 ml; bazo (u otro órgano); arena lavada y calcinada; ácido clorhídrico (1 N); cloruro de sodio (0.1 M y 2.0 M); hidróxido de sodio (0.4 %); difenilamina; ribosa (1 %)
Material. 1. Bazo
En el mortero muelen 2 - 3 g de bazo con una cantidad igual de arena, agregan al principio 5 ml de solución 2 M de cloruro de sodio, previamente enfriada, y luego paulatinamente, pequeñas porciones de 50 ml de cloruro de sodio 1 M. La molienda se prolonga durante 15 min en el mortero enfriado con hielo. La masa obtenida de trasvasa a un tubo de centrífuga y centrifugan por 15 min. Después de medir el volumen del centrifugado, le añaden a este, un volumen de agua destilada 6 veces mayor con un chorro fino, agitando lentamente con la varilla de madera. La nucleoproteína que se obtiene en forma de hilos se enrolla en el palito de madera.
Reacción con difenilamina.
El ácido desoxirribonucléico se detecta por su reacción con difenilamina, la cual con desoxirribosa da un color azul. El ácido ribonucléico (o ribosa), a diferencia de ADN , da con este reactivo un color verde.
En un tubo de ensayo colocan un poquito del precipitado de ADN y lo disuelven en 1 - 2 ml de solución 0.4 % de hidróxido de sodio. A la solución le agregan un volumen igual de difenilamina y la mezcla la calientan en baño de agua hirviendo cerca de 10 - 15 min. Aparece un color azul. En otro tubo calientan con difenilamina la solución de ribosa a la cuál se agregó 1 - 2 ml de solución de álcali. La mezcla toma un color verde.
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