Lab. Acción de la Amilasa [Reporte]
Principios teóricos:
La amilasa es una enzima que cataliza la hidrólisis del enlace glucosídico (α-1-4)
del almidón y del glucógeno hasta formar productos intermedios
denominados dextrinas. El almidón posee capacidad de formar con yodo un
complejo de color azul. El glucógeno forma un complejo rojo.
El método está basado en el estudio de la velocidad de hidrólisis del almidón, determinado por la disminución del sustrato (almidón) por medio de la reacción con solución de yodo o por el aumento del producto (maltosa), revelado por la reacción de Fehling (formación de precipitado rojo de óxido de cobre). El yodo sirve como reactivo para el almidón y las dextrinas, que forma con ellos compuestos complejos coloreados (Ver Tabla 2). La amilosa del almidón forma con el yodo un complejo de color azul, el glucógeno —pardo rojizo—, y las dextrinas, dependiendo de la masa molecular toman un color pardo-rojizo o amarillento.
El método está basado en el estudio de la velocidad de hidrólisis del almidón, determinado por la disminución del sustrato (almidón) por medio de la reacción con solución de yodo o por el aumento del producto (maltosa), revelado por la reacción de Fehling (formación de precipitado rojo de óxido de cobre). El yodo sirve como reactivo para el almidón y las dextrinas, que forma con ellos compuestos complejos coloreados (Ver Tabla 2). La amilosa del almidón forma con el yodo un complejo de color azul, el glucógeno —pardo rojizo—, y las dextrinas, dependiendo de la masa molecular toman un color pardo-rojizo o amarillento.
La maltosa, como disacárido reductor,
se revela por la reacción con el reactivo de Fehling, la cuál está
basada en la capacidad de los carbohidratos, es reducir en medio
alcalino, el ion Cu2+, contenido en el líquido Fehling en
forma de compuesto complejo con los tartratos, hasta óxido cuproso de
color rojo, que se desprende en forma de precipitado.
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| Formación de hemiacetal en la glucosa |
Reactivos
- Almidón al 0.2%,
- Yodo 0.1% en yoduro de potasio (0.2%) (Lugol)
- Solución de saliva
- Ácido clorhídrico, solución al 10%.
Instrumental
Gradillas con tubos de ensayo; pipetas de 5 ml, goteros, embudo con algodón; varillas de vidrio; baño de agua con termómetro.
Procedimiento experimental
- Preparación de la solución de saliva: El voluntario se lavó la boca 3 veces con agua para eliminar los residuos de comida. Luego se enjuagó la boca durante tres minutos con 50 ml de agua desionizada en varias posiciones.Se filtró a través de algodón y se utilizó en calidad de enzima.
Discusión de Resultados
La reacción de Fehling da positivo debido a la presencia de maltosa que es un azucar reductora. Las propiedades reductoras se dan por la presencia de grupos hemiacetales en casi todos los disacáridos (Excepto la sacarosa)
Recomendaciones:
- Para solubilizar el almidón es importante calentarlo suavemente y agitarlo hasta lograr una solución homogénea.
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